Construcción de AAV para el silenciamiento de IRS1
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Mostrar el registro completo del ítemcomunitat-uji-handle:10234/158176
comunitat-uji-handle2:10234/71324
comunitat-uji-handle3:10234/167590
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TFG-TFMMetadatos
Título
Construcción de AAV para el silenciamiento de IRS1Autoría
Tutor/Supervisor
Sánchez Pérez, Ana MaríaTutor/Supervisor; Universidad.Departamento
Universitat Jaume I. Unitat Predepartamental de MedicinaFecha de publicación
2017-05-04Editor
Universitat Jaume IResumen
Los efectos de la insulina están mediados por el receptor de insulina IR, que a su vez, activa numerosas vías de señalización intracelular gracias a los sustratos del receptor de insulina, (IRS). Existen varias isoformas ... [+]
Los efectos de la insulina están mediados por el receptor de insulina IR, que a su vez, activa numerosas vías de señalización intracelular gracias a los sustratos del receptor de insulina, (IRS). Existen varias isoformas y en el cerebro la IRS1 y la IRS2 son las más abundantes.
El objetivo de este estudio es construir un plásmido como herramienta para el estudio de la función de IRS1 e IRS2 específicamente en el tejido cerebral.
Se diseñan las secuencias del shIRS1 con enzimas de restricción para clonarlo posteriormente dentro del plásmido (pSM155-EGFP). Después, mediante una PCR se amplifica el shIRS1-EGFP. Los primers utilizados para esta PCR se diseñan con secuencias de recombinación para la BP Clonasa II para integrarlos en un plásmido formando el pENTR 3’. Mediante una LR Clonasa II se integra el pENTR anterior y otro pENTR 5´con el promotor específico de neuronas (ESYN) para formar el pDEST.
Como resultado, hemos podido clonar secuencias silenciadoras (shIRS1) para la construcción posterior de AAV que se inyectarán in vivo. Esta nueva técnica abre la puerta a futuras investigaciones acerca de la función de los IRS y más ampliamente de la vía de la insulina en el cerebro. [-]
The effects of insulin are mediated by the insulin receptor (IR), which in turn activates numerous intracellular signaling pathways thanks to the insulin receptor substrates (IRS).
The objective of this study is to ... [+]
The effects of insulin are mediated by the insulin receptor (IR), which in turn activates numerous intracellular signaling pathways thanks to the insulin receptor substrates (IRS).
The objective of this study is to construct a plasmid that as a tool that will allow us the study of the function of IRS1 and IRS2 specifically in brain.
shIRS1 sequences are designed and subsequently cloned into a plasmid (pSM155-EGFP). Using PCR, the shIRS1-EGFP from pSM155 is amplified. These DNA fragments have in their terminal sequences recombination sites that are recognized by the BP Clonase II to integrate them into a plasmid forming the pENTR 3’. A LR Clonase II integrates the previous pENTR 3’ and another pENTR 5’ with neuronal specific promoter (ESYN) to form the pDEST.
As a result, we have been able to construct silencing sequences in order to pack them into a of AAV particle for in vivo studies. This new technique opens the door to future research on the role of the IRS and more broadly of the insulin pathway in the brain. [-]
Palabras clave / Materias
Descripción
Treball de Final de Grau en Medicina. Codi: MD1158. Curs acadèmic 2016-2017
Tipo de documento
info:eu-repo/semantics/bachelorThesisDerechos de acceso
info:eu-repo/semantics/openAccess
Aparece en las colecciones
- Grau en Medicina [494]
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