Desarrollo y optimización de un método para la determinación de ácidos orgánicos en orina mediante GC-MS

Abstract

Se conoce como microbiota intestinal (MI) a la población de microorganismos que habitan en los intestinos humanos. Está formada por más de mil especies de bacterias, además de virus y hongos, que llevan a cabo funciones esenciales para el organismo. El desequilibrio en la composición de la MI se define como disbiosis intestinal y está relacionada con un gran número de patologías. Los ácidos orgánicos (AO) en orina pueden reflejar el estado de la MI y ayudar al diagnóstico de disbiosis. En el presente estudio, se proponen dos métodos para la determinación de AO en muestras de orina mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS). Uno de ellos basado en una extracción líquido-líquido de la orina seguido de una trimetilsilil-derivatización, En la otra metodología, la muestra de orina se evapora bajo corriente de gas nitrógeno, y posteriormente el residuo seco se derivatiza de forma análoga al anterior. Se han realizado diferentes pruebas de optimización con 5 compuestos AO seleccionados del perfil de disbiosis que se utilizan en el laboratorio clínico para evaluar cada método propuesto. Los resultados obtenidos hasta el momento no han permitido encontrar la mejor metodología, aunque el método de evaporación presenta la ventaja de ser más práctico para un laboratorio que realice análisis de rutina. La aplicación de la metodología a muestras reales de orina, ha permitido identificar 38 metabolitos de importancia clínica. Alternativamente, también se han realizado experiencias de AO en orina mediante una determinación basada en cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (LC-MS). Sin embargo, el método no resultó satisfactorio para los 5 analitos seleccionados. El presente trabajo queda abierto, teniendo que realizar mayor número de pruebas para optimizar la metodología propuesta y lograr la determinación conjunta de todos los analitos “target”.