Métodos inmunológicos para la detección de cambios en el sistema dopaminérgico: western blot y neurohistología para la detección de DARPP-32
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Títol
Métodos inmunológicos para la detección de cambios en el sistema dopaminérgico: western blot y neurohistología para la detección de DARPP-32Data de publicació
2016Editor
Universitat Jaume IISSN
2443-9827Tipus de document
info:eu-repo/semantics/articleParaules clau / Matèries
Resum
La detección de cambios en los niveles de un neurotransmisor, como la dopamina o
de su cascada metabotrópica que se inicia con la activación de sus receptores tras la
realización de una conducta o un tratamiento ... [+]
La detección de cambios en los niveles de un neurotransmisor, como la dopamina o
de su cascada metabotrópica que se inicia con la activación de sus receptores tras la
realización de una conducta o un tratamiento farmacológico en estructuras cerebrales
concretas, puede ser realizada con técnicas inmunológicas. Los métodos inmunoquímicos
en general se fundamentan en la utilización de anticuerpos específicos para el
marcaje de una proteína concreta. En el caso de que se quiera localizar la proteína en
áreas o neuronas concretas por inmunohistología, los anticuerpos unidos a enzimas
(peroxidasa o fosfatasa) o a fluorocromos aplicados a cortes histológicos de cerebro,
se unen a la proteína antigénica de interés permitiendo su marcaje mediante una reacción
colorimétrica o emisión de fluorescencia, respectivamente. Esta técnica nos
ofrece la oportunidad de realizar un mapeado cerebral y observar en qué regiones la
proteína de interés está presente y en qué medida. Por ejemplo, se han utilizado estas
técnicas para el marcaje y/o cuantificación de algunos marcadores dopaminérgicos,
como el DARPP -32, en el núcleo accumbens. Además, esa proteína puede ser cuantificada
mediante la técnica western blot (WB). El WB requiere de la homogeneización del
tejido, desnaturalización de proteínas y su separación por peso molecular mediante
electroforesis y da como resultado una reacción quimioluminiscente detectable por
una película fotográfica. Ambas técnicas son complementarias, pues ofrecen información
de localización y permiten cuantificar la proteína. [-]
Detecting changes in the levels of a neurotransmitter such as dopamine or changes in
the metabotropic cascade initiated by the activation of its receptors in specific brain
structures after performing a behavior or ... [+]
Detecting changes in the levels of a neurotransmitter such as dopamine or changes in
the metabotropic cascade initiated by the activation of its receptors in specific brain
structures after performing a behavior or receiving a specific drug therapy, can be accomplished
with immunological techniques. Immunochemical methods are based onthe affinity of antibodies for a particular protein. The antibodies are bound to a marker
that provides color or fluorescence. In the immunohistological methods, after the antibody
is applied to a specific brain section where the antigenic protein is localized, neurons
containing the targeted protein show the color or fluorescence, and they can be
identified and quantified by microscopy and imaging processing techniques. For example,
these techniques have been used for the localization and quantification of some
dopaminergic markers such as DARPP -32, in the nucleus accumbens. This protein can
be quantified also by western blotting (WB). The WB requires tissue homogenization,
protein denaturalization and separation of proteins by molecular weight with electrophoresis,
and results in a detectable chemiluminescent reaction by an X-ray film. Both
techniques
complement each other providing information about localization, as well as
quantity of protein present in the tissue. [-]
Publicat a
Àgora de salut vol. IIIDrets d'accés
© Del text: els autors i les autores, 2016
© D’aquesta edició: Publicacions de la Universitat Jaume I, 2016
info:eu-repo/semantics/openAccess
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